第十章 兰科花卉的组 织培养 目的要求： ? 掌握百合生物学特性和快速繁殖 方法； ? 掌握兰科植物组培的大致过程； ? 掌握胡蝶兰花梗组培的方法。 职业学院 职业学院 第一节 百合的组织培养 全世界已发现百合约89余种，主要分布地 区是中国、日本、和欧洲等温带地区。 百合协 第十章 兰科花卉的组 织培养 目的要求： ? 掌握百合生物学特性和快速繁殖 方法； ? 掌握兰科植物组培的大致过程； ? 掌握胡蝶兰花梗组培的方法。 职业学院 职业学院 第一节 百合的组织培养 全世界已发现百合约89余种，主要分布地 区是中国、日本、和欧洲等温带地区。 百合协会将百合园艺品种划分为10个种系， 观赏栽培的主要是4个种系，即亚洲百合杂种 系；茶香百合杂种系；东方百合杂种系；麝香 百合杂种系。株形端正，花色清白给人以清纯、 高雅的印象，是切花中的佳品。 职业学院 职业学院 职业学院 我国近年来，昆明、上海、深 圳的百合切花生产发展较快，已形 成三大生产。目前国内切花栽 培的百合大多是亚洲型，主要从荷 兰、日本引进，经过几年的栽培试 验，已筛选出一批适合我国生产的 品种。 职业学院 一、形态特性和生物学习性 百合是百合科百合属植物的统称，为多年 生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径 5~8cm，白色或黄白色，茎高30~90cm，直 立，叶多而散生，披针形，光滑。花单生或数 花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒状，有清 香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。 百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良 好的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。 职业学院 二、繁殖方法 1.分球 百合老鳞茎(母球)生长过程中，于茎 轴上逐渐形成小鳞茎，称茎生小球，经 一年栽培，可分生1~3个甚至7~9个小球， 适当深栽及摘除花蕾，均有助于子球发 生，小鳞茎待明春播于苗床，大者1年， 小者培养2~3年可当种球。 职业学院 2.鳞片扦插 取成熟健壮的老鳞茎，阴干数日后剥下 鳞片，斜插于湿润木屑或颗粒泥炭中，温度 以20~25℃为适，一般8~9月插，经2~4个 月生根发叶，并在鳞片基部生长出小磷片， 基质含水量在60％~ 80％，前期高水分，后 期低水分，过分湿润易腐烂。为防止病菌感 染，应尽量除去外层鳞片，1片鳞片可获50～ 60个子球，自鳞片扦插、生根、发芽至植株 开花，一般需2~3年。 职业学院 三、百合的组织培养 百合的组织培养繁殖自20世纪70年 代后期开始，日本人以叶片为外植体诱 导出大花卷丹的小植株，我国于80年代 初由兰洲百合的花药、花丝等培育出完 整小植株。80年代以后，培养出去病毒 的百合种苗和通过胚培养获得远缘杂交 的新品种。 职业学院 1.花器的组织培养 (1)取材和灭菌 采取开花前数日的花蕾。花蕾的表 面用酒精灭菌，再在酒精灯上灼烧数秒 钟，以后放在无菌培养皿内剥开花蕾， 花丝，子房，花柱等分别切取3～5mm 长，接种到培养基上。也可用花瓣和萼 片培养。 职业学院 (2)培养基及培养条件 采用MS，KC等培养基，蔗糖浓 度以7.0％为适，这样发芽和子球形 成率可达90％左右。光照度2000Lx， 每天照用15h，保温 20℃。 职业学院 培养条件 花柱、花梗、茎段等用 MS+IAAl+BA0．2培养基， 叶片用MS+NAAI+BA0．1； 分化植株时， MS+NAA2+IBA0．4+Kt0．05，培养 基内均加蔗糖3％和琼脂0．7％，pH 值5.8~6.5。 职业学院 (3)生长情况 花器部位 从百合花器不同部位的培养来 看，以花丝的部位为好，成活率很高，发芽 较多，再是子房和花柱部分。可从各部位发 芽，形成子球，通常是经过两个途径，一个 是从切中处形成愈伤组织，以后再发芽；再 是从切口直接产生芽。麝香百合花器培养得 到的植株，生长约6个月即可开花，未发现不 正常现象，只是母株的花较大，且全株无病 毒症状。 职业学院 2.鳞片组织培养 百合鳞片等培养，对于扩大培 养材料来源，加快繁殖速度和培养 得到无病毒苗等皆有重要意义。 职业学院 初代培养： 由于其鳞茎材料都生长在 土中，受土壤微生物的影响，所以污染 率相当高。为此外植体消毒要严加注意， 可应用几种消毒剂并用的方法。取 0．5cm2鳞片小块接人MS+2，4D1+IAAI+Kt0．5培养基中，置于 20土2℃，照光9-10h／d，光强1200Lx 条件下培养。 职业学院 接种后2周，即有98％左右的鳞片切块在近 轴面或边缘上有淡的不定芽原基呈环 状突起，多数每块上有2~4个，这些不定 芽原基继续生长4周后，可形成中间抽出绿 色的白色小鳞茎，在小鳞茎基部发生一些 粗壮的根。将幼苗切成1.5~2cm长的片断， 接种到愈伤组织的培养基上。3周后叶 子的基部、叶脉、叶缘上均可出一团 团淡的愈伤组织。 职业学院 继代培养 （分化培养）时，可用 MS+NAA2+IBA0．4+Kt0.05培养基。将 愈伤组织转移到分化培养基上，10周后， 愈伤组织逐渐膨大，分化出许多大小不 等的鳞茎，并在小鳞茎的基部长出许多 粗壮的根。有少数的小鳞茎中间可长出 绿芽。将小鳞茎分离出以后，留下的愈 伤组织转移到相同的新鲜分化培养基上， 一段时间后仍能分化出小鳞茎。 职业学院 试管苗移栽时首先应把根部的培养基清 洗干净。移栽前，放在4~10℃低温条件 下锻炼2～3周，这样移栽后的幼苗生长 更加健壮。移栽幼苗最好用消毒的腐殖 土或泥炭土加蛭石的混合基质，育苗盘 必须清洗消毒。同时，移栽后注意湿度 管理，相对湿度控制在80％~90％。同 时要防止烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水 过多，并及时喷洒药剂预防病虫危害。 职业学院 四、打破休眠的方法 百合切花栽培中首先要解决的技 术问题是：避免因球根的休眠而导致 发芽率不高及盲花。由于同一圃场生 产的球根，其休眠状态各种各样，尤 其休眠深的球根，仅靠贮藏无法打破 休眠。 需要人工打破休眠 职业学院 1.冷藏 13~15℃预冷，3～5℃冷藏6-7周。 2.温水浸泡 开始于48℃的温水中，每隔2~3min提 起再泡入，反复2~3次，然后在45℃温水中 浸泡1h。严格掌握水温。 3.激素处理 采用1000xGA溶液浸泡，为避免发根阻 碍，可先将球根倒置浸泡一半，而后恢复正 常予以静置。 职业学院 第二节 兰花的组织培养技术 职业学院 兰花系兰科植物，在自然条件下 主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几 倍，所以无法大量繁殖生产，而且由 于长期进行无性繁殖，带病毒株增多， 逐渐使种性降低，影响生长。 职业学院 法国Morel(1952年)等以大丽花茎尖进行 培养试验，得到了无病毒植株。后来他观察 到虎头兰的茎尖在无菌培养基上能形成扁圆 形的小，这些小与种胚发育成的原 非常相似，故称为原球茎。原球茎增殖 很快，并可形成幼苗。这一方法和技术很快 在兰花生产上 得到了广泛的应用，成为“兰 花工业”。 兰花培养成功的关键，首先是形成 无性繁殖系原球茎。 职业学院 国 兰 原 球 茎 的 增 殖 职业学院 职业学院 一、培养部位 兰科植物可以培养的部位主要是顶芽 和侧芽，个别可从叶片培养得植株。 1.新芽的茎尖 茎尖是细胞最旺盛的部分，也是 培养成功率最高的部位。 2.花梗 当兰花开花约一个月后，剪取其花梗 顶端及若干个花梗腋芽。 职业学院 二、茎尖的选取、灭菌和接种 1.芽的准备和灭菌 取2～6cm大小切取下来，流水冲洗，并把最 外面的1~2片苞叶去掉，再用10％次氯酸钠或 漂白粉溶液(10g漂白粉溶解于140ml水中，充 分搅拌匀后，静置约20min，取上清液)中浸 10~15min。剥离和切割。容易产生褐变的， 在切割时应将芽放在无菌水中操作，这样会比 在空气中褐变的机会少些。以消除病毒为目的 时要尽量小些，可以小到0.1mm：若以繁殖为 目的，培养物可在2~5mm左右。 职业学院 2.接种 茎尖接种以固体培养基为好，但 因属而异，如蕙兰属在液体培养基培 养形成原球茎后则用固体培养基进行 继代培养，而卡德兰属和石斛属这一 类易变褐枯死的属，以在液体培养基 为好。 职业学院 3.继代培养 接种后1~2个月培养的茎尖即可形 成原球茎球状体，以后即发芽生根长叶。 应在其发芽前把它切成小块进行转移， 让它继续不断地形成原球茎球状体。这 样连续的进行继代培养，短时间可以得 到大量的原球茎球状体。 职业学院 4.培养基 对于许多兰花来说，MS培养基 最好。另外KnudsonC(KC)培养基也 不错。 职业学院 6.试管苗的移栽 苗有3~4叶大小，根2~3条时可移植。 (1)从试管内取的苗用水将琼脂冲洗掉， 冲洗不彻底会发生霉菌腐烂。 (2)经水冲洗的苗放在旧报上，吸干水分 阴晾1h再定植。 (3)管理上，50％的弱光，温度20~25℃， 保持一定的湿度，不能完全密闭，也要 注意通风。根在开始生长后可1周浇一次 1000倍的复合肥料。 职业学院 第三节 蝴蝶兰的培养 职业学院 1.尖的培养 (1)将芽除去叶后，用水冲洗，10％的漂 白粉灭菌15min。除去叶原基后，用5％ 的漂白粉灭菌l0min，以后用无菌水冲洗 3~5次。 (2)切取茎尖和各叶基部的腋芽，约 2~3mm大小，接种到培养基中。 (3)培养基采用VW培养基，添加15％CM 进行液体培养，或进行固体培养。 职业学院 职业学院 (4)培养条件为温度25℃，光照强度 2000Lx，照明16~24h。液体培养基用 60r／min的速度进行振荡培养，培养 7~10d再转移到新的培养基，培养1个月 后转移到固体培养基。在这种条件下培养 1个月即可形成原球茎球状体，以后再进 行继代培养，不断繁殖原球茎球状体。 职业学院 2.花梗腋芽的培养 (1)采芽 将带腋芽的花梗进行冲洗， 用10％的漂白粉溶液表面灭菌20min， 除去腋芽的苞叶，再在5％的漂白粉 溶液中表面灭菌3min，无菌水冲洗 净。 (2)不带花梗组织，仅取腋芽，接种 到培养基上。 职业学院 职业学院 (3)培养基和培养条件： 诱芽培养基：MS+BA3 原球茎：MS+BA5+NAA0、5 增殖：MS+BA3+NAA0、2+炭1.5克/L 生根：1/2MS+BA1+NAA0.5 PH：5.4 培养条件是光照强度2000Lx，光照时间每天 13h，保持恒温25℃。 职业学院 生根之前可以进行过渡培 养，不加激素。 试管苗的移栽用苔藓作基 质。测试你前世怎么死的 职业学院 复习思考题 (1)百合的生物学特性怎样?怎样用 鳞茎进行组织培养? (2)兰科植物培养过程包括哪几个环 节? (3)蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁 殖? 职业学院
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